細胞怎么培養?看技術怎么說

來源: 上海中喬新舟生物科技有限公司   2019-12-23   訪問量:1640評論(0)

細胞培養從原理上來說并不復雜,所需設備也比較簡單,但它仍是一份需要耐心的工作。針對不同細胞,培養時需根據細胞特性選擇不同的包被液,消化液等。對于培養貼壁能力較弱的細胞或原代細胞時,為了促進細胞貼壁需要對培養瓶、培養皿等耗材進行包被處理。目前sciencell最主要的包被液有多聚賴氨酸(Poly-L-Lysine, Cat. #0403 or Cat. #0413)、牛血漿纖維粘連蛋白(Bovine Plasma Fibronectin,Cat. #8248)、0.2%的明膠溶液(0.2% Gelatin Solution,Cat. #0423)。


多聚賴氨酸是一種合成化合物,是帶正電荷的氨基酸,通過改變培養基質表面的電極來促進細胞貼壁。除了促進細胞貼壁生長,包被液多聚賴氨酸包被后能提高原代細胞的存活率和促進神經突長出。ScienCell公司多聚賴氨酸(Poly-L-Lysine, Cat. #0403 or #0413)分子量70 - 150 kDa,推薦以2 ug/cm2的濃度包被培養瓶,37℃孵箱1小時或4℃冰箱過夜。人口腔角質細胞(Cat. #2610)等需用多聚賴氨酸進行包被,以促進細胞貼壁。ScienCell公司的包被液牛血漿纖維粘連蛋白(Bovine Plasma Fibronectin, Cat. #8248)使用親和色譜法自牛血漿提純,是促進細胞貼壁和生長的理想基質。適用于人主動脈內皮細胞(Cat. #6100)、人臍靜脈內皮細胞(Cat. #8000)等內皮細胞和間充質干細胞等,纖維粘連蛋白分子量440-500kDa的糖蛋白,存在于細胞表面蛋白和血漿中,它可與細胞膜表面受體和細胞外基質成分結合;明膠是來自于膠原的高分子量水溶蛋白混合物,sciencell公司0.2%的明膠溶液(0.2% Gelatin Solution, Cat. #0423)用于包被培養器皿以促進細胞貼壁,推薦用于分化的人胚胎干細胞,某些原代細胞和永生化細胞。不管是原代細胞還是細胞系,如果想達到最佳效果請根據細胞類型進行選擇。


細胞傳代過程中消化是至關重要,不同的細胞對應的消化液不同,快來看看中喬新舟強勢推出的胰酶吧!sciencell公司原代細胞傳代時需要使用0.05%胰酶消化液( 0.05%Trypsin/EDTA Solution,Cat. #0183)或者可用DPBS對0.25%胰酶消化液( 0.25%Trypsin/EDTA Solution,Cat. #0103)稀釋后使用。對于細胞系通常使用0.25%胰酶溶液進行消化,但是有些細胞對胰酶作用比較敏感,例如:HK-2人腎上皮細胞 、MCF 10A人乳腺細胞等,推薦使用0.05%胰酶消化,以減小胰酶對細胞的作用。

細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融,最大限度的保存細胞活力是我們凍存細胞的一致目標。目前細胞凍存多采用二甲基亞砜(DMSO)作保護劑,這種物質能提高細胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外,減少細胞內冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法,這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。強烈推薦sciencell有血清凍存液(Cat. #0133)和無血清的凍存液(Cat. #0143),小規格(50ml/瓶)包裝,減少分裝步驟。解凍后的細胞可直接接種到含完全生長培養液的培養瓶中直接進行培養,24小時后再用新鮮完全培養液替換舊培養液,以去除DMSO,減少離心和重懸對細胞的損傷,使用起來更加方便。

良好的操作習慣,恰到好處的試劑才能保證細胞良好的狀態?蒲新飞,中喬新舟與您同行!



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