CRISPR / Cas9上海吉凱基因化學技術有限公司

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技術服務信息

服務名稱:CRISPR / Cas9
服務類別:分子生物學服務 - 基因組分析服務
價格:詢價
允許參觀:協商決定
所在區域:上海.上海
更新時間:2019/7/25 9:21:00
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上海吉凱基因化學技術有限公司
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技術服務詳細描述

CRISPR / Cas9 

 CRISPR/Cas9是一種能夠對基因組的特定位點進行精確編輯的技術。其原理是核酸內切酶Cas9蛋白通過導向性RNA(guide RNA, gRNA)識別特定基因組位點并對雙鏈DNA進行切割,細胞隨之利用非同源末端連接(Non homologous End Joining,NHEJ)或者同源重組(Homologous Recombination, HR)方式對切割位點進行修復,實現DNA水平基因敲除或精確編輯。

CRISPR / Cas9 基因敲除

利用CRISPR / Cas9 進行單基因敲除

目前研究最透徹、應用最廣泛的II 型-CRISPR/Cas9 系統由兩部分組成:

1. 單鏈的guide RNA(single-guide RNA,sgRNA)

2. 有核酸內切酶活性的Cas9 蛋白

CRISPR/Cas9 系統利用sgRNA 來識別靶基因DNA,并引導Cas9 核酸內切酶剪切DNA(圖1)。當基因組發生雙鏈DNA 斷裂后,細胞通過非同源性末端接合(Non-homologous end joining, NHEJ) 將斷裂接合,在此過程中,將隨機引入N 個堿基的缺失或增加,若N 非3 的倍數,則目的基因發生移碼突變,實現基因敲除。CRISPR 相對ZFN,TALEN 等基因打靶技術而言更為簡單,廉價,高效,已經得到廣泛應用。

                                           圖1 CRISPR / Cas9 KO 原理


CRISPR/Cas9 基因敲除優勢



RNA 干擾是從mRNA 水平對目的基因進行敲減,而Cas9 是從基因組水平對基因進行敲除,可完全消除目的基因在細胞內的表達,靶蛋白的功能也因此完全喪失。此外,CAS9 靶點選擇范圍可以擴大到所有基因組序列,如啟動子、內含子等等都可以被剪切(表1)。

                                   表1 CRISPR/Cas9 基因敲除與RNAi 比較

產品介紹


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